百迪MSC無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基-普通款500ml
- 品名： 百迪MSC無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基-普通款500ml
- 型號： S1012-500
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
產(chǎn)品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | MSC 無血清完全培養(yǎng)基配制： 將干細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑按比例加入到 MSC 無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混合均勻，即為人間充質(zhì) 干細(xì)胞完全培養(yǎng)基，4℃保存，2 周內(nèi)使用。原代（P0）分離時建議使用青鏈雙抗避免污染。 原代間充質(zhì)干細(xì)胞分離（組織塊法） 1. 手術(shù)臺上取正常健康新生兒臍帶，浸泡于含雙抗的無菌生理鹽水或 PBS 中常溫或 4℃保 存； 2. 超凈臺內(nèi)取出臍帶，用生理鹽水或者 PBS 洗去臍帶殘留血液，剪成 3-4cm 小段； 3. 用生理鹽水或者 PBS 再次清洗，用組織鑷去除臍帶中的 2 條臍動脈； 4. 沿臍靜脈將臍帶剪開，用組織鑷刮去靜脈，放入生理鹽水或者 PBS 中洗滌 2-3 次，剪成 1.5mm 左右大小。 5. 將剪好買的組織塊均勻鋪于培養(yǎng)皿中，間隔 5mm 左右。 6. 放置 5-10 分鐘后，根據(jù)所選培養(yǎng)容器添加相應(yīng)量的培養(yǎng)基，放置于 37℃、5%CO2 培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)； 7. 培養(yǎng) 3 天后，鏡下觀察有無細(xì)菌污染，進行半量換液； 8. 細(xì)胞培養(yǎng)至 7-10 天可見長梭形細(xì)胞從組織塊內(nèi)爬出，7 天進行全換液，培養(yǎng)至 12-15 天可見大量細(xì)胞爬出，此時爬出的細(xì)胞記為 P0； 9. 待組織塊周邊細(xì)胞密度達(dá)到 80%-90%左右時，重組胰酶消化細(xì)胞進行傳代； 10. 傳代后的細(xì)胞記為 P1，以此類推。 人間充質(zhì)干細(xì)胞傳代與凍存： 1. 待細(xì)胞融和度達(dá)到約 80%后進行傳代(細(xì)胞不能太密集，否則容易分化)，吸棄瓶中的培 養(yǎng)基，加適量 DPBS 輕輕沖洗 1 次。 2. 根據(jù)培養(yǎng)瓶適量加入溫和型細(xì)胞消化液，T175 建議使用 3-5ml，在室溫作用 1-3min (可輕拍培養(yǎng)瓶幫助細(xì)胞脫落)。 3. 顯微鏡下觀察細(xì)胞完全脫落后，用移液器輕輕吹打細(xì)胞，使細(xì)胞完全脫落，然后 1000 rpm 離心 3-5min。 4. 謹(jǐn)慎吸出上清，細(xì)胞團塊用適當(dāng)體積的完全培養(yǎng)基懸浮后，混勻細(xì)胞懸液。 5. 按照 6000-8000cells/cm2 的細(xì)胞密度將細(xì)胞接種至 T175 培養(yǎng)瓶中加入 25ml 細(xì)胞懸 液，使其均勻的鋪在培養(yǎng)瓶底部，放入 37℃, 5% CO2 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。 6. 每 2-3 天更換一次培養(yǎng)基，待細(xì)胞融合度達(dá)到 80%左右時，進行細(xì)胞傳代操作或者收獲 細(xì)胞進行細(xì)胞凍存操作。 7. 細(xì)胞凍存: 將細(xì)胞團塊懸浮于適量無血清干細(xì)胞專用凍存液中，凍存液重懸細(xì)胞密度為 5*105-5*106 cells/ml；裝入凍存管，-80℃冰箱放置 24h，轉(zhuǎn)入液氮罐中長期凍存。 間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇： 1. 人間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基提前預(yù)熱，在生物安全柜或超凈臺中吸取適量（如 T-75 瓶： 10-15mL)完全培養(yǎng)基沿上表面加入間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，切勿沖到細(xì)胞培養(yǎng)瓶底面。 然后慢慢將細(xì)胞培養(yǎng)瓶平放，在 37℃、恒溫 CO2 培養(yǎng)箱中放置 5-10 分鐘后使用。可讓 培養(yǎng)基中的促貼壁物質(zhì)更好地與細(xì)胞培養(yǎng)瓶底部結(jié)合，使間充質(zhì)干細(xì)胞的貼壁能力增強， 降低“生長空洞”出現(xiàn)的概率。 2. 從液氮中取出凍存的間充質(zhì)干細(xì)胞，迅速將凍存管放入 37℃水浴中，快速融解。 3. 用 70%-75%酒精消毒凍存管外壁，在生物安全柜或超凈臺中打開凍存管，將細(xì)胞懸液 緩慢移入裝有 5-10mL 完全培養(yǎng)基的離心管中。 4. 1200rpm 離心 5min，棄上清，加入 2mL 完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，計數(shù)，按密度 6000- 8000 cells/cm2 將細(xì)胞接種至步驟 1 中孵育完的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，添加細(xì)胞時細(xì)胞懸液直 接加到底部，切忌沖到細(xì)胞培養(yǎng)瓶底面。 5. 輕輕搖晃細(xì)胞培養(yǎng)器瓶，使細(xì)胞均勻分布，混勻后，置于 37℃、5%CO2、飽和濕度的培 養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 6. 2-3 天后，更換新鮮的完全培養(yǎng)基。 |
| 注意事項 | 1. 本產(chǎn)品使用過程中應(yīng)注意無菌操作，避免污染。 2. 試劑包裝如有破損或滴漏，嚴(yán)禁使用。 3. 為保持本產(chǎn)品的最佳使用效果，請勿進行凍融處理； 4. 本產(chǎn)品置于2～8℃，避光保存，禁止使用超出規(guī)定有效期的產(chǎn)品。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 | 2-8℃避光保存，有效期 12 個月。 |
產(chǎn)品詳情
BDBIO 間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基-普通款是一款無血清、無異源成分的培養(yǎng) 基，用于多種來源(即骨髓、脂肪組織、臍帶組織和牙髓) 間充質(zhì)干細(xì)胞的原代分離及傳代培 養(yǎng)，具備保持間充質(zhì)干細(xì)胞的多譜系分化潛能及維持其良好的增殖速率的特性。可根據(jù)實驗 需求搭配干細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑使用。
S1013-500 MSC無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基-普通款（無酚紅）
暫無內(nèi)容...
