- 品名： TaKaRa 定點(diǎn)突變操作的試劑盒
- 品牌： TaKaRa
- 型號(hào)： R401
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
商品名稱：TaKaRa MutanBEST Kit
商品編號(hào)：SPU2021050590
上架時(shí)間：2022-01-04
| ■ 制品內(nèi)容 (20 次量) |
| Pyrobest DNA Polymerase (5 U/μl)15 μl10×Pyrobest Buffer II200 μldNTP Mixture (2.5 mM each)180 μl10×Blunting Kination Buffer50 μlBlunting Kination Enzyme Mix25 μlLigation Solution I*150 μl * Ligation Solution I 即為L(zhǎng)igation Kit Ver.2.1 的一種組份。 |
| ■ 制品說(shuō)明 |
| 本制品是利用PCR技術(shù)進(jìn)行定點(diǎn)突變操作的試劑盒。其原理是利用導(dǎo)入變異點(diǎn)的引物進(jìn)行PCR反應(yīng)后，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行末端平滑化及5’磷酸 (P) 化處理，再用高效連接試劑Ligation Solution I進(jìn)行自身連接 (環(huán)化反應(yīng))，然后轉(zhuǎn)化、提取突變體DNA。本試劑盒的原理十分簡(jiǎn)單，但Taq酶在PCR過(guò)程中的錯(cuò)配率限制了這一技術(shù)的應(yīng)用。現(xiàn)在，Takara的Pyrobest DNA Polymerase使這一技術(shù)得到了很好的發(fā)揮。Pyrobest DNA Polymerase不僅具有很高的保真性（Fidelity），并且和TaKaRa Taq具有同樣的擴(kuò)增效率。與其他突變?cè)噭┖邢啾龋驹噭┖械奶攸c(diǎn)是操作方便、簡(jiǎn)單，只需一天時(shí)間便可完成整個(gè)操作，并且不受載體、宿主菌的限制。 ■ 保存-20℃。 ■ TaKaRa MutanBEST Kit原理試劑盒原理見下圖，全套操作約需5小時(shí)，簡(jiǎn)單說(shuō)明如下。1. 設(shè)計(jì)一對(duì)5’端鄰接，3’端方向相反的引物用以導(dǎo)入變異點(diǎn)。2. 進(jìn)行PCR擴(kuò)增 (使用高保真DNA聚合酶Pyrobest DNA Polymerase)。3. PCR片段的末端平滑及5’末端磷酸化反應(yīng) (在同一反應(yīng)體系內(nèi)進(jìn)行，反應(yīng)只需10分鐘)。4. 自身連接反應(yīng) (使用本試劑盒中的DNA高效連接液Ligation Solution I，連接反應(yīng)只需30 分鐘至1小時(shí))。5. 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化，挑選變異體。 |
| ■ 注意事項(xiàng) |
| 1. 當(dāng)載體與插入的DNA片段的總長(zhǎng)度小于5 kb時(shí)，使用本試劑盒較為合適；如果載體與插入DNA 片段長(zhǎng)度太長(zhǎng)時(shí)，不推薦使用本試劑盒。 2. PCR反應(yīng)后的DNA片段應(yīng)進(jìn)行切膠回收純化，然后再進(jìn)行自身連接反應(yīng)，這樣可以提高突變成功率。 3. Ligation Solution I請(qǐng)于冰中融解，使用前混勻。應(yīng)避免多次反復(fù)凍融。 4. 連接轉(zhuǎn)化效率低時(shí)，請(qǐng)?jiān)囉孟率龇椒ㄟM(jìn)行改進(jìn)。 ① 確認(rèn)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。 ② 延長(zhǎng)連接反應(yīng)時(shí)間至過(guò)夜反應(yīng)。 |
| TaKaRaMutanBESTKit | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 |
| Takara | R401 | TaKaRaMutanBESTKit | 20次 |
暫無(wú)內(nèi)容...
